Lors de la préparation des bactéries pour l'observation au microscope, la fixation thermique du frottis sur la lame tue les bactéries pour arrêter la propagation potentielle de la maladie et adhère le frottis à la lame. Après la fixation thermique, le frottis est taché.
Selon le département de microbiologie de l'Université du Wisconsin-Madison, la préparation des frottis commence par un échantillon de bactéries mélangé à un peu d'eau distillée. L'échantillon est étalé finement sur la lame et laissé sécher à l'air. Ensuite, la lame est fixée à chaud en passant le dessous à travers la flamme d'un bec Bunsen à quelques reprises. Après une bonne fixation thermique, la diapositive est chaude mais pas trop chaude. Lorsque la lame a refroidi, la teinture est appliquée.
