Dans les cellules eucaryotes, la glycolyse a lieu dans le cytosol. Après la glycolyse, les produits peuvent être décomposés davantage dans les mitochondries.
La glycolyse décrit une série de réactions chimiques qu'une cellule subit afin de produire de l'énergie rapidement. Une série de réactions dans une cellule est appelée voie métabolique. La glycolyse commence par la libération de molécules de glucose stockées sous forme de glycogène et leur transformation en un composé appelé glucose 6-phosphate. Deux molécules d'adénosine triphosphate, qui est la source d'énergie d'une cellule, sont nécessaires pour cette première étape. Au total, la glycolyse produit un total de 4 ATP par molécule de glucose, ce qui signifie qu'il y a un gain net de 2 ATP par molécule de glucose de cette voie.
