Dans la pièce shakespearienne "Macbeth", Macduff choisit de fuir en Angleterre en réponse au meurtre de Duncan par Macbeth pour soutenir Malcolm, le fils et héritier de Duncan. En fuyant en Angleterre, cependant, Macduff condamne sa propre famille, qui est assassinée par Macbeth en réponse. En fuyant en Angleterre, Macduff tente également de persuader Malcolm de récupérer le trône écossais avec une démonstration de force.
Dans la pièce, le premier dialogue de Macduff implique la découverte du cadavre du roi Duncan à l'intérieur du château de Macbeth. Sa décision de fuir en Angleterre est due à son soupçon que Macbeth était, en fait, le meurtrier de Duncan. Alors qu'il est en Angleterre et tente de persuader Malcolm d'agir, Macduff est informé de la mort de sa famille et des conséquences de son action par un autre thane écossais du nom de Ross.
Macduff retourne finalement en Écosse aux côtés de Malcolm et de leurs alliés anglais et rencontre Macbeth au combat au château de Dunsinane. Macduff tue finalement Macbeth, bien que dans la pièce cela se produise en dehors de la scène. Il présente ensuite sa tête à Malcolm et le déclare roi légitime d'Écosse.
Avant l'assassinat du roi Duncan par Macbeth, Macduff portait le titre de Thane of Fife. Les premières références à Macduff se trouvent dans un ouvrage du XIVe siècle intitulé "Chronica Gentis Scotorum".
