Les mouffettes mâles et femelles pulvérisent comme mécanisme de défense lorsqu'elles se sentent menacées. Les mâles pulvérisent tout en rivalisant avec d'autres mâles pendant la saison de reproduction. Si une femelle n'apprécie pas les avances d'un mâle, elle le vaporise au lieu de s'accoupler.
Une mouffette ne transporte que 15 cc de son liquide musqué à la fois, ce qui est suffisant pour cinq pulvérisations. Il faut une semaine à 10 jours pour en produire plus ; par conséquent, la pulvérisation est le dernier recours des mouffettes.
Avant de pulvériser, une mouffette passe par une série de signes avant-coureurs pour dissuader les menaces. Ces signes avant-coureurs incluent le sifflement, le fait de taper du pied et de lever la queue.