La défenestration de Prague est un incident de la résistance bohémienne à l'autorité des Habsbourg qui a été au cœur du début de la guerre de Trente Ans. Cela s'est passé le 23 mai 1618. En réponse aux autorités catholiques romaines de Bohême qui fermaient les chapelles protestantes, une assemblée de protestants a jugé et déclaré coupables les régents impériaux d'avoir violé la lettre de majesté. Ils ont ensuite jeté les hommes et leur secrétaire par la fenêtre.
Les régents impériaux William Slavata et Jarolsav Martinic et le secrétaire Fabricius n'ont pas été grièvement blessés après avoir été projetés par les fenêtres de la salle du conseil du château de Prague. L'acte a marqué le début d'une révolte de Bohême contre l'empereur des Habbourg Ferdinand II, qui était l'une des phases d'ouverture de la guerre de Trente Ans. La lettre de majesté a été rédigée par l'empereur Rodolphe II en 1609 pour garantir certaines libertés religieuses. En 1617, en fermant les chapelles protestantes construites par les citoyens des villes de Broumov et Hrob, les autorités catholiques ont violé la Lettre de majesté. L'assemblée des protestants a été nommée en vertu de la lettre de majesté pour sauvegarder les droits protestants.
Le mot "défensation" fait référence au fait de jeter quelqu'un par la fenêtre. Une autre défenestration de Prague a eu lieu en 1419, mais le terme fait généralement référence à l'incident ultérieur. Le premier incident s'est produit lorsqu'une foule de hussites tchèques radicaux a tué plusieurs membres du conseil municipal et a été un tournant qui a conduit aux guerres hussites.