La colonie de Jamestown dans l'actuelle Virginie a été la première colonie en vertu de la charte accordée à la Virginia Company par le roi James I. Les colons de la Virginia Company ont débarqué sur l'île de Jamestown le 14 mai 1607. Le règlement a grandi et a finalement tenu la première assemblée représentative anglaise en Amérique du Nord.
Le capitaine Bartholomew Gosnold a conduit les colons à construire une colonie sur l'île de Jamestown, car elle se trouvait dans une position où les navires espagnols ne pourraient pas attaquer facilement ; cependant, les Indiens ont attaqué la colonie quelques jours après le débarquement. Après avoir survécu à l'attaque, les gens ont commencé à construire un fort rudimentaire.
En 1609, le fort a subi une explosion de poudre à canon, qui a blessé le capitaine John Smith, l'homme chargé d'aider à approvisionner la colonie en marchandises en provenance d'Angleterre. La colonie a à peine survécu l'hiver suivant en raison du manque de ravitaillement, des raids indiens et du mauvais temps ; seulement 60 colons ont survécu jusqu'au printemps 1610. En juin, un navire d'Angleterre est finalement arrivé, apportant avec lui de nouvelles fournitures et un nouveau gouverneur, Lord De La Warr.
De plus, la colonie était connue pour être associée aux Amérindiens Pocahontas et à son père, le chef Powhatan. Elle épousa le cultivateur de tabac John Rolfe en 1614.