Les colonies du milieu hébergeaient un mélange diversifié de religions qui comprenaient des quakers, des luthériens, des presbytériens, des amish, des congrégationalistes et des juifs. En raison de divers maîtres coloniaux dans la région, les traditions religieuses de nombreux pays européens existaient dans la zone. Les colonies du milieu comprenaient New York, le New Jersey et la Pennsylvanie.
La Pennsylvanie était peut-être la plus tolérante des colonies du milieu. Il a été fondé par William Penn, un éminent quaker qui l'a envisagé comme un refuge non seulement pour les quakers mais pour les personnes de toutes les minorités religieuses persécutées. La Pennsylvanie a attiré des colons de nombreuses traditions religieuses, y compris les mennonites et les amish, qui contribuent encore à la diversité du paysage religieux de la région. Les autres colonies étaient également diverses, mais aucune d'entre elles n'était aussi active que la Pennsylvanie.