Certaines villes importantes sur une carte de la rivière Ohio sont Pittsburgh, Pennsylvanie ; Cincinnati, Ohio ; Louisville, Kentucky ; Huntington, Virginie-Occidentale ; et Evansville, Indiana. D'autres endroits remarquables le long de la rivière Ohio sont les villes de Parkersburg, Wheeling et Weirton en Virginie-Occidentale, ainsi que la ville d'Owensboro dans le Kentucky.
La rivière Ohio commence à Pittsburgh. De là, la rivière coule vers le nord par les villes de Pennsylvanie de Sewickley, Coraopolis, Ambridge et Aliquippa. Dans la ville de Rochester, la rivière Ohio tourne vers l'ouest. La rivière passe ensuite par les villes de Beaver et Midland avant d'atteindre la frontière de la Pennsylvanie avec l'État de l'Ohio.
En passant la ville de l'Ohio à East Liverpool, la rivière tourne vers le sud. La route de la rivière définit la frontière de l'Ohio avec la Virginie-Occidentale. Les villes du côté Ohio de la rivière comprennent Steubenville, Martins Ferry, Marietta et Gallipolis. Les villes du côté de la Virginie-Occidentale de la rivière comprennent Wheeling, New Martinsville, Parkersburg, Point Pleasant et Huntington.
Autour de la ville d'Ironton dans l'Ohio, la rivière Ohio commence à définir la frontière entre les États de l'Ohio et du Kentucky. Certaines villes du Kentucky de l'autre côté de la frontière de l'Ohio comprennent Ashland, Vanceburg, Maysville, Brooksville et Newport. Après que la rivière passe Cincinnati, la rivière commence à définir la frontière du Kentucky avec l'Indiana. Après avoir passé la ville de Mount Wilson dans l'Indiana, la rivière Ohio définit la frontière du Kentucky avec l'Illinois. La rivière Ohio se jette dans le fleuve Mississippi au Caire, dans l'Illinois.
