La déclaration d'indépendance a été signée par 56 personnes. Bien que John Hancock, le président du Congrès continental, ait signé le document le 4 juillet 1776, la plupart des délégués ont probablement ajouté leur signature le 2, 1776. Le dernier signataire a ajouté son nom le 4 novembre 1776.
La signature de la Déclaration d'Indépendance était un geste symbolique, car elle était déjà officialisée par le vote du Congrès. La signature de John Hancock était non seulement la première mais aussi la plus importante. C'était tellement emblématique que son nom est devenu synonyme du mot "signature". Les historiens ne sont pas d'accord sur le fait que la plupart des délégués ont signé le 4 juillet ou le 2 août. Cependant, certains délégués doivent avoir signé plus tard que le 4 juillet car ils ont rejoint le Congrès après l'adoption du document le 4 juillet. La dernière personne à signer était Matthew Thornton du New Hampshire, qui a rejoint le Congrès continental en novembre 1776 et a signé dans le coin inférieur droit du document. Le plus jeune signataire était Edward Rutledge, à 26 ans, et le plus âgé était Benjamin Franklin, à 70 ans.
Tous les délégués au deuxième congrès continental n'ont pas signé la déclaration d'indépendance. Certains avaient voté contre, tandis que d'autres étaient absents lors de la signature du document. La première version envoyée aux États n'incluait pas les 56 signatures, mais le 18 janvier 1777, le Congrès a ordonné qu'une autre version comprenant les signatures soit distribuée aux 13 États.