Chez les eucaryotes et les procaryotes, la glycolyse se produit dans le cytoplasme de la cellule. La glycolyse est la première étape de la respiration cellulaire, qui compte 10 étapes en tout.
La glycolyse est la première étape du métabolisme cellulaire, décomposant le glucose en pyruvates. Les pyruvates sont ensuite capables de se métaboliser davantage par fermentation ou respiration aérobie. Parce que la glycolyse ne nécessite pas d'oxygène, elle peut se produire dans les organismes aérobies ainsi que anaérobies. Ce processus comporte 10 étapes et se produit également dans les cellules végétales, les cellules de micro-organismes et les cellules animales. Pour les bactéries, ce processus est la seule source d'énergie. Les processus restants de la respiration cellulaire sont effectués dans les mitochondries.